小鼠Toll樣受體3(TLR3)ELISA試劑盒實驗說明書

　　貨號：BS-9374

　　名稱：小鼠Toll樣受體3(TLR3)ELISA試劑盒

　　規格：96T/48T

　　目前主流品牌的小鼠TLR3 ELISA試劑盒說明書框架和核心操作基本統一，以下是整理后的通用標準實驗說明書，適配大多數科研用試劑盒：

　　小鼠Toll樣受體3(TLR3)ELISA試劑盒使用說明書

　　一、試劑盒原理

　　本試劑盒采用?雙抗體夾心法?檢測小鼠樣本中TLR3的含量：

　　預包被板上已包被小鼠TLR3特異性抗體，加入樣本/標準品后，目標TLR3會與包被抗體結合;再加入生物素標記的檢測抗體，形成"抗體-抗原-生物素化抗體"復合物;隨后結合HRP標記的鏈霉親和素，催化底物TMB顯色，顏色深淺與樣本中TLR3濃度呈正相關，通過酶標儀檢測吸光度(OD值)即可計算樣本濃度。

　　二、試劑盒組分(96T規格)

　　三、適用樣本類型

　　可檢測小鼠血清、血漿、細胞培養上清、組織勻漿、細胞裂解液等樣本;腦脊液、尿液等特殊樣本需提前驗證適配性。

　　四、實驗前準備

　　試劑配制?：

　　洗滌液：20×濃縮洗滌液用去離子水按1:19稀釋，室溫存放備用

　　標準品：標準品離心后加入樣本稀釋液溶解，定容至濃度1000pg/mL，室溫靜置10min后梯度倍比稀釋，得到1000、500、250、125、62.5、31.25、15.62、0pg/mL共8個濃度梯度

　　樣本預處理?：

　　血清/血漿：離心取上清，4℃保存不超過24h，長期分裝-20℃凍存，避免反復凍融

　　組織勻漿：按1:9(質量/體積)比例加入預冷PBS，研磨破碎后離心取上清，同上保存

　　提前將所有試劑平衡至室溫(20-25℃)，避免溫度差影響反應。

　　五、標準操作步驟

　　加樣?：分別設置標準品孔、樣本孔、空白孔，空白孔加100μL樣本稀釋液，標準品/樣本孔每孔加100μL，輕輕晃動混勻，封板后37℃孵育1h

　　洗板?：棄去液體，每孔加200μL洗滌液，靜置30s后棄去，重復洗板5次，拍干微孔板

　　加檢測抗體?：每孔加入100μL生物素標記檢測抗體，封板后37℃孵育1h

　　洗板?：重復步驟2，洗板5次拍干

　　加酶結合物?：每孔加入100μL HRP-鏈霉親和素，封板后37℃避光孵育30min

　　洗板?：重復步驟2，洗板5次拍干

　　顯色?：每孔加入100μL TMB底物，37℃避光顯色15-30min(根據顏色深淺調整時間，避免過度顯色)

　　終止讀數?：每孔加入50μL終止液終止反應，15min內用酶標儀在450nm波長下讀取各孔OD值

　　六、結果計算

　　以標準品濃度為橫坐標，校正OD值(標準品OD值減去空白孔OD值)為縱坐標，繪制四參數邏輯回歸標準曲線

　　根據樣本OD值從標準曲線中計算得到樣本TLR3濃度，若樣本濃度超出線性范圍，需稀釋后重新檢測，結果乘以稀釋倍數即可

　　七、性能參數

　　檢測范圍：15.6pg/mL ~ 1000pg/mL

　　靈敏度：低檢測限<4pg/mL

　　重復性：批內變異系數CV<8%，批間變異系數CV<10%

　　特異性：與小鼠其他TLR家族成員無交叉反應

　　八、注意事項

　　試劑盒避免凍存，超過有效期禁止使用，不同批次試劑禁止混用

　　TMB底物避免接觸氧化劑和強光，顯色后及時讀數，終止后避免長時間放置

　　實驗過程中需佩戴手套、口罩，不同試劑更換槍頭，避免交叉污染

　　終止液為酸性溶液，操作時注意防護，若接觸皮膚及時清水沖洗

　　注：以上科研資料僅供參考!